Adenosine A2A-R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400807-ACT

ADORA2A kodiert den Adenosin-A2A-Rezeptor (A2A-R), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der vor allem über Gs signalisiert, den cAMP-Spiegel erhöht und PKA/CREB‑abhängige Transkriptionsprogramme aktiviert. A2A-R integriert extrazelluläre Adenosin-Signale, die bei metabolischem Stress oder Entzündungen entstehen, und moduliert dadurch Antworten wie Zytokinproduktion, Leukozytenaktivierung und neuromodulatorische Signalübertragung. Im zentralen Nervensystem ist ADORA2A in striatalen Schaltkreisen besonders stark exprimiert, wo es funktionell mit dopaminerger Signalgebung zusammenwirkt und so synaptische Plastizität und Motorik reguliert. Eine fehlregulierte ADORA2A-Signalgebung wurde mit Neuroinflammation und neurodegenerativen Prozessen sowie mit tumorassoziierter Immunsuppression in Verbindung gebracht, was seine Eignung zur Analyse von Signalwegen in immunologischen und neurowissenschaftlichen Modellen unterstreicht.

Adenosine A2A-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADORA2A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Adenosine A2A-R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADORA2A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADORA2A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Adenosine A2A-R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADORA2A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Adenosine A2A-R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Adenosine A2A-R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADORA2A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.