ADE2 Double Nickase Plasmid (h): sc-418581-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADE2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADE2 Double-Nickase-Plasmid (h) und ADE2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PAICS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADE2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418581-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADE2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418581-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PAICS kodiert die Phosphoribosylaminoimidazol‑Succinocarboxamid‑Synthase, allgemein als ADE2 bezeichnet, ein bifunktionelles Enzym, das zwei aufeinanderfolgende Schritte der de‑novo‑Purinsynthese katalysiert, die zur Bildung von Inosinmonophosphat führen. Durch die Steuerung des Flusses durch die Purinnukleotidsynthese unterstützt ADE2 die DNA-/RNA‑Synthese, die ATP/GTP‑Homöostase und einen auf Proliferation ausgerichteten Stoffwechsel, eng gekoppelt an den Ein‑Kohlenstoff‑Stoffwechsel und Nukleotid‑Salvage‑Prozesse. Eine Störung der PAICS‑Aktivität kann das zelluläre Redox‑ und Biosynthesegleichgewicht verschieben und wurde im Kontext proliferationsassoziierter Zustände und metabolischer Reprogrammierung untersucht. PAICS ist zudem relevant für die Erforschung der Purinosom‑Assemblierung und einer kompartimentierten Nukleotidbiosynthese unter variierenden Nährstoffbedingungen.
ADE2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PAICS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PAICS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PAICS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PAICS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.