ADAR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401611-ACT

ADAR (ADAR1) kodiert ein RNA-editierendes Enzym, das die Adenosin-zu-Inosin-(A‑zu‑I)-Deaminierung innerhalb doppelsträngiger RNA katalysiert und dadurch Transkriptsequenzen, Spleißstellen und die RNA-Struktur verändert. Durch die Editierung endogener dsRNA moduliert ADAR1 angeborene Immun-Signalwege, einschließlich der Unterdrückung fehlgeleiteter Interferon-Signalisierung und der Regulation der zytosolischen RNA-Überwachung. Die ADAR1-Aktivität beeinflusst posttranskriptionelle Programme der Genregulation, die Zellzustandsübergänge, Stressantworten und Tumor–Immun-Interaktionen prägen. Fehlregulierte RNA-Editierung und eine gestörte ADAR1-Funktion wurden mit Interferonopathien und krebsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, was ADAR1 zu einem zentralen Ziel für mechanistische Studien der RNA-Prozessierung und Immunregulation macht.

ADAR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.