ADAMTS-7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403381-ACT

ADAMTS7 kodiert ADAMTS‑7, eine sekretierte, zinkabhängige Metalloproteinase der ADAMTS‑Familie, die die extrazelluläre Matrix durch die Prozessierung von Proteoglykan‑Substraten und die Regulation des Matrixumsatzes umbaut. Über seine katalytischen und akzessorischen Domänen beeinflusst ADAMTS‑7 Zell‑Matrix‑Interaktionen, Gewebeumbau und entzündliche Signalprogramme, die die Homöostase von Gefäß- und Bindegewebe prägen. Eine veränderte ADAMTS7‑Expression oder ‑Aktivität wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die für die Migration vaskulärer glatter Muskelzellen und die Umgestaltung der extrazellulären Matrix relevant sind, was auf eine Beteiligung an Mechanismen hindeutet, die mit Atherosklerose und der Anfälligkeit für koronare Herzkrankheit assoziiert sind. ADAMTS‑7 wird daher häufig in Modellen von Gefäßverletzung, fibroseähnlichem Remodeling und matrixgetriebenen Veränderungen der Signalübertragung untersucht.

ADAMTS-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAMTS7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAMTS-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAMTS7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAMTS7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAMTS-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAMTS7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAMTS-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAMTS-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAMTS7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.