Plásmido CRISPR de Activación (h) ADAMTS-5: sc-402695-ACT

ADAMTS5 codifica ADAMTS-5, una metaloproteinasa secretada dependiente de zinc que escinde proteoglucanos de la matriz extracelular, en particular agrecano y versicano, y de este modo regula el recambio de la matriz y la remodelación tisular. La actividad de ADAMTS-5 influye en la homeostasis del cartílago, la composición de la matriz pericelular y los eventos de señalización célula–matriz que se entrecruzan con mediadores inflamatorios y con la disponibilidad de factores de crecimiento. La expresión o actividad proteolítica desregulada de ADAMTS5 se ha asociado con una degradación acelerada de la matriz extracelular en procesos articulares degenerativos y con patología más amplia del tejido conectivo. Como enzima modificadora de la matriz, ADAMTS-5 se estudia habitualmente en vías que gobiernan el catabolismo del cartílago, la remodelación del estroma y el equilibrio entre proteasas e inhibidores.

ADAMTS-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADAMTS5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAMTS-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADAMTS5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADAMTS5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAMTS-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADAMTS5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAMTS-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAMTS-5 en células tumorales con expresión de ADAMTS5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.