ADAMDEC1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405515-ACT

ADAMDEC1 kodiert eine sekretierte Metalloprotease aus der ADAM‑Familie (a disintegrin and metalloprotease), die zur Umgestaltung der extrazellulären Matrix und zur Regulation der perizellulären Proteolyse beiträgt. Das Protein ist vorwiegend mit myeloiden und mukosalen Immun-Kompartimenten assoziiert, wo es mit inflammatorischer Signalübertragung, Leukozytendifferenzierung und Prozessen der Gewebeüberwachung in Verbindung gebracht wurde. Durch die Modulation des extrazellulären Milieus kann ADAMDEC1 Zellmigration, Adhäsionsdynamiken und zytokinresponsive Signalwege beeinflussen, die lokale Immunantworten prägen. Eine veränderte ADAMDEC1-Expression wurde in Studien zu gastrointestinalen Entzündungen, zur Biologie des Tumormikromilieus und zur Immuninfiltration beschrieben, was seinen Wert als molekularen Readout in der Immunologie- und Krebsforschung unterstreicht.

ADAMDEC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADAMDEC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ADAMDEC1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADAMDEC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADAMDEC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ADAMDEC1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADAMDEC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ADAMDEC1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ADAMDEC1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADAMDEC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.