ADAM8 Double Nickase Plasmid (h): sc-407606-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADAM8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADAM8 Double-Nickase-Plasmid (h) und ADAM8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADAM8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ADAM8: sc-374421
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADAM8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAM8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAM8 (a disintegrin and metalloproteinase 8) ist eine membranverankerte Protease, die die perizelluläre Proteolyse, das Ectodomain-Shedding sowie Zell–Zell- und Zell–Matrix-Interaktionen reguliert. Über seine Metalloprotease- und Disintegrin-Domänen kann ADAM8 die Adhäsion und Migration von Leukozyten, den Umbau der extrazellulären Matrix und inflammatorische Signalwege beeinflussen und ist damit in Signalwege eingebunden, die Gewebeschädigungsantworten koordinieren. Eine veränderte ADAM8-Expression wurde mit einer fehlregulierten Immunzellmigration und proteasegetriebenen Veränderungen des Mikromilieus in Verbindung gebracht, wie sie bei chronisch-entzündlichen Erkrankungen und in verschiedenen Tumorkontexten beobachtet werden. Dies unterstützt seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zu Invasion, metastaseassoziierten Prozessen und Immunmodulation. Diese Eigenschaften machen ADAM8 zu einem relevanten Ziel, um proteolytische Signalnetzwerke und die Regulation von Zelloberflächenrezeptoren in menschlichen Zellen zu untersuchen.
ADAM8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADAM8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADAM8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADAM8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADAM8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.