Plasmide Double Nickase (h) ADAM8: sc-407606-NIC

ADAM8 (a disintegrine et métalloprotéinase 8) est une protéase ancrée à la membrane qui régule la protéolyse péricellulaire, le clivage (shedding) des ectodomaines et les interactions cellule–cellule/cellule–matrice. Grâce à ses domaines métalloprotéase et disintegrine, ADAM8 peut influencer l’adhésion et la migration des leucocytes, le remodelage de la matrice extracellulaire et la signalisation inflammatoire, en s’intégrant à des voies qui coordonnent les réponses aux lésions tissulaires. Une expression altérée d’ADAM8 a été associée à un trafic dysrégulé des cellules immunitaires et à des modifications du microenvironnement induites par des protéases, observées dans diverses affections inflammatoires chroniques et dans de multiples contextes tumoraux, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans l’étude de l’invasion, des processus associés aux métastases et de la modulation immunitaire. Ces caractéristiques font d’ADAM8 une cible pertinente pour disséquer les réseaux de signalisation protéolytique et la régulation des récepteurs de surface cellulaire dans les cellules humaines.

ADAM8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADAM8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADAM8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADAM8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADAM8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.