Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM8 (m): sc-418993

Présentation

Adam8 code une métalloprotéase-désintégrine transmembranaire (ADAM8) qui assure le clivage de l’ectodomaine (« shedding ») et participe aux interactions cellule–cellule ou cellule–matrice, en intégrant la protéolyse aux signaux d’adhésion. Dans les compartiments immunitaires et stromaux de la souris, ADAM8 contribue à la signalisation inflammatoire, au recrutement des leucocytes et au remodelage tissulaire via la régulation des récepteurs de surface et de la disponibilité des cytokines/chimiokines. Son activité recoupe des voies associées aux sorties de signalisation MAPK et NF-κB en modulant l’activation des récepteurs et les signaux provenant du microenvironnement extracellulaire. Une expression dérégulée d’Adam8 a été associée à l’inflammation chronique, à la fibrose et à des processus liés aux tumeurs tels que l’invasion et le remodelage de la niche métastatique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adam8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adam8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adam8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adam8 pour l'étude de la signalisation de ADAM8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adam8 essentiels à la fonction de ADAM8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adam8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADAM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adam8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM8 plasmide HDR (m) et le ADAM8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adam8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adam8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.