Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM15 (h): sc-405627

Présentation

ADAM15 code une métalloprotéase–désintégrine transmembranaire qui participe au clivage de l’ectodomaine ainsi qu’aux interactions cellule–cellule et cellule–matrice via ses domaines protéase, désintégrine et cytoplasmique. Elle module des réseaux de signalisation liés à l’adhésion et à la motilité, notamment des voies associées aux intégrines, et peut influencer la disponibilité de ligands et de récepteurs ancrés à la membrane par une protéolyse régulée. L’activité d’ADAM15 a été associée à des processus tels que la migration, l’invasion et la signalisation inflammatoire, et une expression altérée a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, notamment la progression tumorale et les atteintes vasculaires. En tant que protéase associée à la surface cellulaire, ADAM15 est souvent étudiée pour sa contribution au remodelage extracellulaire et au dialogue entre voies de signalisation au niveau de la membrane plasmique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADAM15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADAM15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADAM15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADAM15 pour l'étude de la signalisation de ADAM15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADAM15 essentiels à la fonction de ADAM15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADAM15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ADAM15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADAM15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM15 plasmide HDR (h) et le ADAM15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADAM15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADAM15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.