ADAM10 Double Nickase Plasmid (h): sc-400883-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADAM10 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADAM10 Double-Nickase-Plasmid (h) und ADAM10 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADAM10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ADAM10: sc-28358
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADAM10 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400883-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAM10 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400883-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAM10 kodiert eine zinkabhängige Transmembran-Metalloprotease der ADAM-Familie, die das Shedding der Ektodomäne verschiedenster Zelloberflächenproteine vermittelt und dadurch die Verfügbarkeit von Rezeptoren sowie die Zell-Zell-Kommunikation umgestaltet. ADAM10 ist an der regulierten intramembranären Proteolyse beteiligt und beeinflusst die Notch-Signalgebung, die Prozessierung von APP sowie die Spaltung von Adhäsions- und immunmodulatorischen Molekülen wie Cadherinen, Liganden und Zytokinrezeptoren. Über diese Aktivitäten wirkt es auf die neuronale Entwicklung, die synaptische Funktion, die Biologie epithelialer Barrieren und Immunantworten und integriert Signale in membrannahen Signalnetzwerken. Eine fehlregulierte ADAM10-Aktivität oder -Expression wurde mit krebsassoziierter Signalgebung und Invasionsphänotypen, neurodegenerativen Mechanismen im Zusammenhang mit dem APP-Stoffwechsel sowie entzlicher Pathophysiologie in Verbindung gebracht, was seinen Wert als mechanistisches Ziel in Pathway-Studien unterstreicht.
ADAM10 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADAM10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADAM10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADAM10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADAM10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.