Plásmido CRISPR de Activación (h) ADAM10: sc-400883-ACT

ADAM10 codifica una metaloproteasa anclada a la membrana de la familia ADAM (una desintegrina y metaloproteasa) que funciona como una α-secretasa principal responsable del desprendimiento del ectodominio (ectodomain shedding) de diversas proteínas de la superficie celular. Al procesar sustratos como receptores/ligandos NOTCH, cadherinas, receptores de citocinas y la proteína precursora de amiloide, ADAM10 influye en decisiones de destino celular, adhesión, migración y señalización inflamatoria en múltiples tejidos. La proteólisis mediada por ADAM10 modula la dinámica de la señalización de Notch y la disponibilidad de receptores de membrana, configurando programas transcripcionales aguas abajo y la comunicación intercelular. La actividad desregulada de ADAM10 se ha asociado con el remodelado patológico de redes de señalización implicadas en neurodegeneración, biología del cáncer y desregulación inmunitaria, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del control de vías dependiente de proteasas.

ADAM10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADAM10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAM10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADAM10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADAM10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAM10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADAM10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAM10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAM10 en células tumorales con expresión de ADAM10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.