ACTR-IB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418975
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ACTR-IB El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ACTR-IB, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ACTR-IB Anticuerpo (ALEX66): sc-73677
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ACTR-IB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-418975 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Acvr1b codifica el receptor de activina A tipo 1B (ACTR-IB/ALK4), un receptor cinasa de serina/treonina de la superfamilia TGF-β que transmite señales de las activinas y ligandos relacionados. Tras la unión del ligando y la formación del complejo receptor, ACTR-IB fosforila SMAD2/3 para regular programas de transcripción que controlan decisiones de destino celular, proliferación, diferenciación y remodelación tisular. En sistemas murinos, la señalización dependiente de Acvr1b se integra con MAPK y otras vías específicas del contexto para modular respuestas del desarrollo y de la homeostasis. La desregulación de la señalización activina/SMAD se utiliza comúnmente para modelar mecanismos relevantes para la fibrosis, la inflamación, la regulación metabólica y fenotipos oncogénicos en entornos experimentales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTR-IB (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acvr1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acvr1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acvr1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTR-IB.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acvr1b para la investigación de la señalización de ACTR-IB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Acvr1b críticos para la función de ACTR-IB
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acvr1b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ACTR-IB CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACTR-IB CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acvr1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTR-IB (m) y el plásmido HDR ACTR-IB (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acvr1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acvr1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.