Plásmido Doble Nickase (h) ACTR-I: sc-401283-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ACTR-I consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ACTR-I (h) y el plásmido de doble nickasa ACTR-I (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ACVR1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ACTR-I Anticuerpo (C-5): sc-374523
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ACTR-I | sc-401283-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ACTR-I | sc-401283-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACVR1 codifica el receptor de activina A tipo I (ACTR-I/ALK2), un receptor con actividad cinasa de serina/treonina de la superfamilia TGF-β que transmite señales de ligandos BMP hacia SMAD1/5/8 y activa programas transcripcionales posteriores. En células humanas, ACTR-I participa en la regulación de la diferenciación osteogénica y condrogénica, el patrón tisular y las decisiones de destino celular mediante la señalización canónica BMP–SMAD y su interacción con MAPK y otras vías del desarrollo. La actividad desregulada de ACVR1 altera la dinámica de la señalización BMP y se ha implicado en trastornos de osificación ectópica y del desarrollo esquelético, incluida la fibrodisplasia osificante progresiva. ACVR1 también se utiliza como nodo de la vía para estudiar el ensamblaje del complejo receptor de BMP, el control de la amplitud de la señal y las salidas transcripcionales dependientes del contexto.
ACTR-I El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACVR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACVR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACVR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACVR1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.