ACTR-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-418974-KO-2

Übersicht

Acvr1 kodiert den Activin-A-Rezeptor Typ I (ACTR-I/ALK2), einen Serin/Threonin-Kinase-Rezeptor vom Typ I innerhalb der TGF-β-Superfamilie, der BMP-Ligandensignale weiterleitet. Nach Ligandenbindung und Aktivierung durch Typ-II-Rezeptoren phosphoryliert ACTR-I SMAD1/5/9 und reguliert so Transkriptionsprogramme, die die embryonale Musterbildung, die osteogene Differenzierung und die Gewebehomöostase steuern. Die ACVR1-abhängige Signalübertragung ist mit MAPK und anderen kontextabhängigen Signalwegen vernetzt, um Zellschicksalsentscheidungen und Reaktionen auf Morphogene zu koordinieren. Eine fehlregulierte ACVR1-Aktivität oder ein Ungleichgewicht im BMP-Signalweg wird mit abnormer Skelettentwicklung und phänotypischen Ausprägungen ektoper Ossifikation in Verbindung gebracht, wodurch Acvr1 einen zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien in der Entwicklungsbiologie sowie in Modellen muskuloskelettaler Erkrankungen darstellt.

Das ACTR-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acvr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acvr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acvr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACTR-I-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acvr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACTR-I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acvr1-Exone abzielen, die für die ACTR-I-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acvr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACTR-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACTR-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acvr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACTR-I HDR-Plasmid (m) und ACTR-I HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acvr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acvr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.