Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
ACTR-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418974
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- ACTR-I Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im ACTR-I-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACTR-I: sc-374523
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACTR-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-418974 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Acvr1 kodiert den Activin‑A‑Rezeptor Typ I (ACTR‑I/ALK2), einen Serin/Threonin‑Kinase‑Rezeptor vom Typ I in der TGF‑β‑Superfamilie, der BMP‑ und Activin‑Liganden auf die nachgeschalteten SMAD1/5/8‑ sowie SMAD‑abhängigen Transkriptionsprogramme überträgt. In Mauszellen trägt ACTR‑I zur Regulation der Entwicklungsmusterung, der osteogenen und chondrogenen Differenzierung sowie der Gewebehomöostase bei, indem es die Signalgebung des Rezeptorkomplexes mit kontextabhängigen Feedback‑Regulatoren integriert. Störungen des ACVR1‑Signalwegs sind mit fehlregulierter BMP‑Signalgebung und aberranten Entscheidungen über Zellschicksale verbunden und damit relevant für Studien zur Skelettbiologie, fibroseähnlichem Remodeling und zur Signaltransduktions‑Kreuzregulation mit MAPK‑ und PI3K/AKT‑Signalwegen. Die experimentelle Untersuchung der Acvr1‑Funktion unterstützt mechanistische Arbeiten zur Rezeptor‑Kinaseaktivität, Ligandenspezifität und zu nachgeschalteten Transkriptionsnetzwerken in physiologischen und krankheitsmodellbezogenen Kontexten.
Das ACTR-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acvr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acvr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acvr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACTR-I-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acvr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACTR-I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Acvr1-Exone abzielen, die für die ACTR-I-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acvr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom ACTR-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACTR-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acvr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACTR-I HDR-Plasmid (m) und ACTR-I HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acvr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acvr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.