ACTBL2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-415610-ACT

ACTBL2 kodiert Actin beta-like 2, ein Protein der zytoskelettalen Actin-Familie, das an der Organisation filamentöser Actin-Netzwerke beteiligt ist, die Zellform, Adhäsion und Motilität unterstützen. Die Actin-Dynamik koordiniert zentrale Prozesse wie Zytokinese, Vesikeltransport und Mechanotransduktion und ist in Signalwege eingebunden, die durch Rho-Familien-GTPasen und Actin-bindende Proteine reguliert werden. Obwohl ACTBL2 weniger gut charakterisiert ist als das kanonische ACTB, ist eine veränderte Actin-Remodellierung allgemein relevant für Phänotypen mit abweichender Migration, Invasion und Gewebearchitektur. Daher bietet die Modulation der ACTBL2-Expression einen nützlichen Ansatz, um Beiträge des Zytoskeletts zu Stressantworten und signalabhängigen Veränderungen der Zellmorphologie zu untersuchen.

ACTBL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ACTBL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACTBL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ACTBL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ACTBL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACTBL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ACTBL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACTBL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACTBL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ACTBL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.