ACTA1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418964

Descripción general

Acta1 codifica ACTA1, la isoforma predominante de α-actina sarcomérica en el músculo esquelético, donde polimeriza formando filamentos delgados que se anclan a los discos Z y permiten la contracción basada en actomiosina. ACTA1 integra la organización estructural del citoesqueleto con la señalización contráctil regulada por calcio, apoyando la miofibrilogénesis, el mantenimiento del sarcómero y la transmisión de la fuerza mecánica. La alteración de la función de ACTA1 perturba la integridad y la contractilidad de las fibras musculares y se asocia con miopatías congénitas, lo que la convierte en un nodo central para estudiar defectos del ensamblaje del sarcómero y mecanismos de degeneración muscular in vivo e in vitro. En sistemas murinos, Acta1 actúa como un marcador clave y un determinante funcional de la diferenciación del músculo esquelético, el remodelado del tipo de fibra y las respuestas al estrés por carga mecánica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acta1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acta1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acta1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTA1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acta1 para la investigación de la señalización de ACTA1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acta1 críticos para la función de ACTA1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acta1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACTA1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACTA1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acta1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTA1 (m) y el plásmido HDR ACTA1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acta1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acta1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.