Plasmide CRISPR d'Activation (h) Acrosin: sc-402292-ACT

L’ACR humain code l’acrosine, une sérine protéase de type trypsine stockée sous forme de proacrosine dans l’acrosome des spermatozoïdes matures. Lors de la réaction acrosomique, l’acrosine participe à la liaison à la zone pellucide et à une protéolyse localisée favorisant la pénétration du spermatozoïde à travers les enveloppes de l’ovocyte, en s’intégrant à des processus associés à la fécondation tels que l’exocytose acrosomique, les cascades d’activation des protéases et le remodelage de la matrice extracellulaire. Une activité acrosinique dysrégulée ou une fonction acrosomique altérée a été associée à des phénotypes d’infertilité masculine, notamment une capacité de fécondation réduite et des interactions anormales entre le spermatozoïde et la zone pellucide. En tant que protéase enrichie dans les cellules germinales, ACR est également utilisé comme marqueur pour étudier la spermatogenèse, la biogenèse de l’acrosome et la maturation fonctionnelle des spermatozoïdes.

Acrosin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Acrosin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Acrosin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Acrosin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Acrosin dans les cellules tumorales présentant une expression de ACR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.