acrogranin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401924-ACT

GRN kodiert Acrogranin (Progranulin), ein sezerniertes Glykoprotein, das Zellwachstum, Überleben und Gewebeumbau unterstützt, indem es inflammatorische Signalwege und die Proteaseaktivität im extrazellulären Milieu moduliert. Acrogranin beeinflusst die lysosomale Homöostase und den endosomalen Transport; seine Spaltung in Granuline kann Zytokinantworten und zelluläre Stressprogramme verändern. Im Nervensystem trägt es zur Mikroglia-Funktion, zur Aufrechterhaltung von Synapsen und zur Widerstandsfähigkeit von Neuronen bei, während es in peripheren Geweben die Wundheilung und stromal-epitheliale Interaktionen beeinflusst. Eine fehlregulierte GRN-Expression oder Haploinsuffizienz ist mit Neurodegeneration und Immunfunktionsstörungen verbunden; veränderte Progranulin-Signalgebung wird außerdem in der Krebs- und Fibroseforschung als Regulator von Proliferation und Entzündung untersucht.

acrogranin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GRN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

acrogranin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GRN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GRN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen acrogranin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GRN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von acrogranin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des acrogranin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GRN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.