Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACP2 (m): sc-418950

Présentation

Acp2 code la phosphatase acide lysosomale 2 (ACP2), une hydrolase qui contribue au renouvellement des esters phosphoriques dans la lumière acide des lysosomes. L’activité d’ACP2 soutient la dégradation lysosomale des macromolécules et s’inscrit au carrefour du trafic endolysosomal, de l’autophagie et des voies de recyclage des nutriments cellulaires. Une altération de la fonction des phosphatases lysosomales peut perturber l’homéostasie des organites et est pertinente pour les mécanismes étudiés dans la dysfonction lysosomale et les phénotypes liés à la neurodégénérescence. Dans des modèles murins, Acp2 est utile pour explorer comment l’équilibre des enzymes lysosomales influence les réponses au stress cellulaire, la fonction des cellules immunitaires et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acp2 pour l'étude de la signalisation de ACP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acp2 essentiels à la fonction de ACP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACP2 plasmide HDR (m) et le ACP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.