ACMSD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435223

Übersicht

Acmsd kodiert die Aminocarboxymuconat-Semialdehyd-Decarboxylase (ACMSD), ein Schlüsselenzym im Kynureninweg des Tryptophanabbaus, das Zwischenprodukte von der Quinolinate-Bildung weglenkt und die de-novo-Biosynthese von NAD⁺ beeinflusst. Durch die Regulation des Gleichgewichts zwischen der Produktion von Picolinsäure und Quinolininsäure kann ACMSD den zellulären Redoxstoffwechsel, die mitochondriale Funktion und entzündliche Signale beeinflussen, die mit der Aminosäure-Sensorik verknüpft sind. Ein veränderter Stofffluss im Kynureninweg wurde mit Neuroinflammation, excitotoxischem Stress und metabolischer Dysregulation in Verbindung gebracht, wodurch Acmsd ein nützliches Ziel für mechanistische Studien im ZNS und in peripheren Geweben ist. In Mausmodellen ermöglicht eine Störung von Acmsd die Untersuchung, wie aus Tryptophan abgeleitete Metaboliten den immun-metabolischen Austausch und die Gewebehomöostase prägen.

Das ACMSD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acmsd-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acmsd-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acmsd nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACMSD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acmsd-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACMSD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acmsd-Exone abzielen, die für die ACMSD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acmsd-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACMSD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ACMSD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acmsd-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACMSD HDR-Plasmid (m) und ACMSD HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acmsd-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acmsd-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.