ACMSD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435223

Panoramica

Acmsd codifica per l’aminocarboximuconato semialdeide decarbossilasi (ACMSD), un enzima chiave della via della chinurenina nel catabolismo del triptofano, che devia gli intermedi lontano dalla formazione di chinolinato e influenza la biosintesi de novo di NAD⁺. Regolando l’equilibrio tra la produzione di acido picolinico e di acido chinolinico, ACMSD può incidere sul metabolismo redox cellulare, sulla funzione mitocondriale e sulla segnalazione infiammatoria legata al sensing degli aminoacidi. Un flusso alterato della via della chinurenina è stato associato a neuroinfiammazione, stress eccitotossico e disregolazione metabolica, rendendo Acmsd un bersaglio utile per studi meccanicistici nel SNC e nei tessuti periferici. Nei modelli murini, la perturbazione di Acmsd consente di investigare come i metaboliti derivati dal triptofano plasmino il crosstalk immuno-metabolico e l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACMSD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acmsd in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acmsd insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acmsd a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACMSD.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acmsd per lo studio della segnalazione di ACMSD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acmsd critici per la funzione di ACMSD
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acmsd per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACMSD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACMSD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acmsd. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACMSD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACMSD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acmsd per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acmsd definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.