Plásmido Doble Nickase (h) ACLP/AEBP1: sc-403540-NIC

AEBP1 codifica la proteína 1 de unión al potenciador de adipocitos, también conocida como ACLP, una proteína secretada y asociada a la matriz extracelular que se une al colágeno y contribuye al ensamblaje de la matriz, la remodelación tisular y la adhesión célula–matriz. En contextos estromales y mesenquimales, AEBP1 se vincula a programas de señalización profibróticos e inflamatorios, influyendo en la activación de fibroblastos, la reparación de heridas y la organización de la matriz extracelular vascular. Se ha informado de una expresión alterada de AEBP1/ACLP en distintos trastornos fibróticos y en múltiples microambientes tumorales, donde se correlaciona con cambios en la composición del estroma, la invasividad y la modulación inmunitaria. Estas características hacen de AEBP1 un objetivo útil para estudiar la biología de la matriz extracelular, el crosstalk fibroblasto–inmunidad y las vías de remodelación que configuran la homeostasis tisular y la progresión de la enfermedad.

ACLP/AEBP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AEBP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AEBP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AEBP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AEBP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.