Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (h): sc-401495-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Acid Ceramidase Double-Nickase-Plasmid (h) und Acid Ceramidase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ASAH1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Acid Ceramidase: sc-136275
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (h) | sc-401495-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Acid Ceramidase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401495-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASAH1 kodiert die saure Ceramidase, eine lysosomale Hydrolase, die Ceramid in Sphingosin und freie Fettsäure spaltet und damit den Sphingolipidabbau mit der Sphingosin-1-phosphat-Signalübertragung verknüpft. Durch die Regulation des Ceramid–Sphingosin-Rheostaten beeinflusst die saure Ceramidase den Membranumsatz, die lysosomale Homöostase, die Autophagie sowie stressresponsive Signalwege, die das Zellüberleben und entzündliche Signalgebung prägen. Eine dysregulierte ASAH1-Aktivität stört das Sphingolipidgleichgewicht und wurde mit lysosomalen Speicherpathologien und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, ebenso wie mit veränderter Lipidsignalgebung in Krebs- und Modellen für metabolischen Stress. ASAH1 wird daher breit im Kontext lipidvermittelter Signalwege, der Qualitätskontrolle von Organellen und der sphingolipidgesteuerten Modulation zellulärer Schicksalsentscheidungen untersucht.
Acid Ceramidase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ASAH1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ASAH1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ASAH1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ASAH1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.