AChE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401091

Übersicht

Das humane Gen **ACHE** kodiert die Acetylcholinesterase (AChE), eine Serin-Hydrolase, die die cholinerge Neurotransmission beendet, indem sie Acetylcholin an Synapsen und neuromuskulären Endplatten rasch hydrolysiert. Über die klassische synaptische Signalübertragung hinaus beeinflusst die AChE-Aktivität die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, die autonome Regulation sowie die cholinerge antiinflammatorische Signalgebung, indem sie die Verfügbarkeit von Acetylcholin moduliert. Eine veränderte ACHE-Expression und enzymatische Dysregulation wurden mit einer veränderten Funktion neuronaler Netzwerke, Stress‑ und neuroinflammationsassoziierten Signalwegen sowie einer erhöhten Anfälligkeit für neuromuskuläre und neurodegenerative Phänotypen in Verbindung gebracht. Als membranverankertes und lösliches Enzym mit gewebespezifischen Isoformen wird ACHE häufig in Modellen der Synapsenphysiologie, der Toxikantantwort und der Wechselwirkungen cholinerger Signalwege untersucht.

Das AChE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACHE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACHE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACHE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AChE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACHE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AChE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACHE-Exone abzielen, die für die AChE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACHE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AChE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AChE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACHE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AChE HDR-Plasmid (h) und AChE HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACHE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACHE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.