ACE2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-427594-ACT

Mouse Ace2 kodiert das Angiotensin-konvertierende Enzym 2 (ACE2), eine zinkabhängige Carboxypeptidase, die das Renin–Angiotensin-System ausgleicht, indem sie Angiotensin II in Angiotensin-(1–7) umwandelt und dadurch die Signalübertragung in Richtung der Mas-Rezeptor-Achse verschiebt. Über die Modulation der Verfügbarkeit von Angiotensinpeptiden beeinflusst ACE2 MAPK-, PI3K/AKT-, Stickstoffmonoxid- und entzündliche Signalwege, die den Gefäßtonus, oxidativen Stress und Gewebeumbau prägen. In mehreren Organen, darunter Lunge, Herz, Niere und Darm, ist die ACE2-Aktivität in präklinischen Modellen mit kardiopulmonalen und metabolischen Phänotypen, fibrotischen Reaktionen und Immunaktivierung verknüpft. Veränderte Ace2-Expression oder -Funktion wird daher häufig in Studien zu hypertonieassoziierten Endorganschäden, akuten und chronischen Lungenschädigungen sowie systemischer Entzündung untersucht.

ACE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ace2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ace2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ace2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACE2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ace2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACE2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACE2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ace2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.