ACBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419950

Descripción general

Dbi codifica la proteína de unión a acil-CoA (ACBP), una chaperona lipídica conservada que se une a ésteres de acil-CoA de cadena media y larga y regula su disponibilidad intracelular. En células de ratón, ACBP favorece el transporte de ácidos grasos y la homeostasis metabólica al influir en la β-oxidación, la síntesis de lípidos y la remodelación de los lípidos de membrana, y puede modular redes de señalización vinculadas al equilibrio energético y a las respuestas al estrés celular. Por estas funciones, DBI/ACBP se estudia habitualmente en vías que conectan el metabolismo lipídico con la función mitocondrial, la autofagia y la inflamación. La desregulación del manejo de acil-CoA y del flujo lipídico es relevante en modelos de disfunción metabólica, neurobiología y dependencia lipídica de células tumorales, lo que convierte a Dbi en una diana útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACBP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dbi en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dbi junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dbi tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACBP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dbi para la investigación de la señalización de ACBP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dbi críticos para la función de ACBP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dbi para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACBP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACBP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dbi. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACBP (m) y el plásmido HDR ACBP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dbi para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dbi definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.