Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBD6 (m): sc-428356

Présentation

Acbd6 code la protéine « acyl-CoA binding domain containing 6 » (ACBD6), une protéine cytosolique de liaison aux lipides qui s’associe aux esters d’acyl-CoA à longue chaîne et contribue à coordonner la gestion intracellulaire des acyl-CoA. En tamponnant et en présentant des acides gras activés aux enzymes en aval, ACBD6 est susceptible d’influencer les flux du métabolisme lipidique, le remodelage des lipides membranaires et des processus dépendants de l’acylation qui relient l’état nutritionnel à la fonction cellulaire. Une perturbation de la disponibilité des acyl-CoA peut affecter le métabolisme mitochondrial, les réponses au stress oxydant et la signalisation inflammatoire, ce qui rend Acbd6 pertinent pour l’étude des dérégulations métaboliques et des phénotypes cellulaires induits par les lipides. L’ACBD6 murine constitue ainsi un point d’entrée utile pour disséquer les voies régulées par les acyl-CoA dans des tissus à fort renouvellement lipidique, notamment le foie, le tissu adipeux et les cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACBD6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acbd6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acbd6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acbd6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACBD6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acbd6 pour l'étude de la signalisation de ACBD6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acbd6 essentiels à la fonction de ACBD6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acbd6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACBD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACBD6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acbd6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACBD6 plasmide HDR (m) et le ACBD6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acbd6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acbd6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.