ACADVL (VLCAD) Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418939

Descripción general

Acadvl codifica la acil‑CoA deshidrogenasa de ácidos grasos de cadena muy larga (ACADVL/VLCAD), una flavoproteína mitocondrial que cataliza el primer paso de deshidrogenación de la β‑oxidación de los acil‑CoA de ácidos grasos de cadena larga. Esta actividad aporta equivalentes reductores al sistema de la flavoproteína de transferencia de electrones y sostiene la producción de energía oxidativa, especialmente en tejidos con alta demanda mitocondrial como el corazón, el músculo esquelético y el hígado. La alteración de ACADVL perturba el catabolismo lipídico, favorece la acumulación de acilcarnitinas de cadena larga y desplaza el metabolismo celular hacia un uso compensatorio de la glucosa y respuestas al estrés. Como enzima central en la oxidación de ácidos grasos y la homeostasis mitocondrial, Acadvl se estudia ampliamente en modelos de inflexibilidad metabólica, disfunción mitocondrial y toxicidad celular inducida por lípidos, relevantes para la investigación de errores innatos del metabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACADVL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acadvl en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acadvl junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acadvl tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACADVL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acadvl para la investigación de la señalización de ACADVL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acadvl críticos para la función de ACADVL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acadvl para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACADVL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ACADVL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acadvl. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACADVL (m) y el plásmido HDR ACADVL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acadvl para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acadvl definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.