Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACADL: sc-404535-ACT

ACADL code pour l’acyl‑CoA déshydrogénase des chaînes longues (ACADL), une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse la première étape de déshydrogénation de la β‑oxydation des acyl‑CoA d’acides gras à longue chaîne. En contrôlant le catabolisme des acides gras, ACADL contribue à la production d’énergie cellulaire, à l’équilibre rédox et à la flexibilité métabolique, en particulier dans les tissus à forte capacité oxydative. Des altérations de l’activité d’ACADL ont été associées à des perturbations de la gestion des lipides et à une dysfonction mitochondriale, avec un intérêt pour les erreurs innées de l’oxydation des acides gras ainsi que pour des phénotypes métaboliques et cardiométaboliques plus larges étudiés dans des modèles cellulaires humains.

ACADL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACADL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACADL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACADL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACADL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACADL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACADL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACADL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACADL dans les cellules tumorales présentant une expression de ACADL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.