Abi-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-417534-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Abi-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Abi-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Abi-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABI1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Abi-1: sc-398554
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Abi-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417534-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Abi-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417534-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABI1 kodiert das Adapterprotein Abl interactor 1 (Abi-1), eine Kernkomponente des WAVE-Regulationskomplexes, der Rac-Signale mit der durch Arp2/3 vermittelten Aktinpolymerisation verknüpft. Über Interaktionen mit ABL-Kinasen, Signaleingänge aus dem PI3K-Signalweg und integrinassoziierte Signalgebung koordiniert Abi-1 Membranruffling, die Bildung von Lamellipodien, Endozytose sowie die Dynamik von Zell-Zell- bzw. Zell-Matrix-Adhäsionen. Eine veränderte ABI1-Expression oder Verschaltungen in seinem Netzwerk wurden in unterschiedlichen Krankheitskontexten mit einer fehlregulierten Zytoskelett-Remodellierung und einem gestörten Signalgleichgewicht in Verbindung gebracht, unter anderem mit krebsassoziierten Migrations- und Invasionsphänotypen. Als Scaffold-Protein dient Abi-1 als mechanistischer Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie Rezeptor- und Kinase-Signalwege auf aktinabhängige Morphogenese und intrazellulären Transport zusammenlaufen.
Abi-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABI1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABI1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABI1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABI1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.