ABHD14B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410211-ACT

Humanes ABHD14B (abhydrolase domain containing 14B) kodiert ein Protein der Serin-Hydrolase-Familie, dem eine Beteiligung am Lipid- und Kleinmolekülstoffwechsel durch hydrolytische Aktivität zugeschrieben wird und das zur zellulären Homöostase sowie zu stressresponsiver Signalübertragung beiträgt. Als Mitglied der α/β‑Hydrolase-Superfamilie wird ABHD14B allgemein mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die den Umbau von Membranlipiden, die mitochondriale Funktion und das Redoxgleichgewicht regulieren – Prozesse, die Proliferation und Entzündungsreaktionen beeinflussen können. Eine veränderte Expression von Hydrolasen dieser Klasse wurde mit metabolischer Dysregulation und Tumorbiologie assoziiert, wodurch ABHD14B ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in Systemen ist, in denen Lipidverarbeitung und Bioenergetik gestört sind. Die funktionelle Untersuchung von ABHD14B unterstützt die Forschung dazu, wie die enzymatische Kontrolle lipidabgeleiteter Signale mit Transkriptionsprogrammen und Zellzustandsübergängen verknüpft ist.

ABHD14B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ABHD14B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ABHD14B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ABHD14B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ABHD14B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ABHD14B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ABHD14B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ABHD14B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ABHD14B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ABHD14B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.