Plasmide Double Nickase (h) AATC: sc-405477-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AATC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AATC Double Nickase (h) et le plasmide AATC Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GOT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AATC Antibody (H-8): sc-515641
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AATC | sc-405477-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain GOT1 code l’aspartate aminotransférase cytosolique (AATC), une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse une transamination réversible entre l’aspartate et l’α‑cétoglutarate, produisant de l’oxaloacétate et du glutamate. Cette activité relie le métabolisme des acides aminés à la navette malate–aspartate, soutenant l’équilibre rédox du NADH, l’anaplérose et le flux de carbone vers le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs). La fonction de GOT1 s’articule avec la gestion de l’azote et les réserves de glutamate/aspartate, qui influencent les programmes biosynthétiques et les réponses cellulaires au stress. Le dérèglement du routage métabolique associé à GOT1 a été étudié dans des contextes d’altération de la bioénergétique et de l’homéostasie rédox, pertinents pour des mécanismes de maladies prolifératives et dégénératives.
AATC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GOT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GOT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GOT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GOT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.