6CKine Plasmide Double Nickase (h): sc-403041-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 6CKine Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 6CKine Double Nickase Plasmid (h) e il 6CKine Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CCL21. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
6CKine Plasmide Double Nickase (h) | sc-403041-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
6CKine Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403041-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCL21 codifica la chemochina 6CKine, una chemochina CC omeostatica che si lega a CCR7 per dirigere la chemiotassi dei linfociti T naïve, dei linfociti T della memoria centrale e delle cellule dendritiche mature verso i vasi linfatici e gli organi linfoidi secondari. Attraverso una segnalazione dipendente da CCR7, CCL21 contribuisce al traffico delle cellule immunitarie, all’organizzazione dei tessuti linfoidi e al coordinamento della presentazione dell’antigene e dell’innesco della risposta immunitaria adattativa. Un’alterazione dell’attività dell’asse CCL21–CCR7 è stata associata a una modificazione dell’infiltrazione leucocitaria, a microambienti infiammatori cronici e a meccanismi rilevanti per il contesto immunitario tumorale e per i pattern di disseminazione metastatica. In quanto chemochina linfoide, CCL21 è spesso studiata per i suoi ruoli nell’instradamento immunitario associato alla linfangiogenesi e nelle interazioni tra stroma e sistema immunitario all’interno dei tessuti.
6CKine Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCL21 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCL21. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCL21. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCL21 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.