Plásmido Doble Nickase (h) 6CKine: sc-403041-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)6CKine consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa 6CKine (h) y el plásmido de doble nickasa 6CKine (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CCL21. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) 6CKine | sc-403041-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) 6CKine | sc-403041-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCL21 codifica la quimiocina 6CKine, una quimiocina CC homeostática que se une a CCR7 para dirigir la quimiotaxis de linfocitos T vírgenes, linfocitos T de memoria central y células dendríticas maduras hacia los vasos linfáticos y los órganos linfoides secundarios. A través de la señalización dependiente de CCR7, CCL21 contribuye al tráfico de células inmunitarias, la organización del tejido linfoide y la coordinación de la presentación de antígenos y el cebado de la inmunidad adaptativa. La actividad desregulada del eje CCL21–CCR7 se ha relacionado con una infiltración leucocitaria alterada, microambientes inflamatorios crónicos y mecanismos relevantes para el contexto inmunitario tumoral y los patrones de diseminación metastásica. Como quimiocina linfoide, CCL21 se estudia con frecuencia por sus funciones en el direccionamiento inmunitario asociado a la linfangiogénesis y en las interacciones estroma-inmunidad dentro de los tejidos.
6CKine El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CCL21 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CCL21. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CCL21. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CCL21 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.