6CKine Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437226-ACT

O gene murino **Ccl21b** codifica a quimiocina **6CKine (CCL21)**, um ligante de **CCR7** que orienta a quimiotaxia de células T naïve, células T de memória central e células dendríticas maduras em direção ao endotélio linfático e às zonas de células T em órgãos linfoides secundários. Ao estabelecer gradientes ao longo dos vasos linfáticos e dentro dos linfonodos, a 6CKine sustenta o tráfego de células imunes, a vigilância de antígenos e a organização de microambientes linfoides. A sinalização **CCL21–CCR7** cruza-se com vias mediadas por GPCR que regulam a remodelação de actina, a ativação de integrinas e a migração direcional, influenciando o posicionamento de leucócitos e a comunicação entre estroma e sistema imune. A atividade desregulada do eixo **CCL21/CCR7** tem sido associada a alterações no recrutamento de células inflamatórias, à remodelação imune ligada à linfangiogênese e a mudanças microambientais observadas em contextos imunomediados e neoplásicos.

6CKine O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ccl21b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

6CKine O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ccl21b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ccl21b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de 6CKine. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ccl21b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de 6CKine no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via 6CKine em células tumorais com expressão de Ccl21b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.