Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) 53BP1: sc-400321-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)53BP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa 53BP1 (h) y el plásmido de doble nickasa 53BP1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TP53BP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: 53BP1 Anticuerpo (E-10): sc-515841
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) 53BP1 | sc-400321-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) 53BP1 | sc-400321-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TP53BP1 codifica 53BP1, un factor de respuesta al daño del ADN asociado a la cromatina que se acumula en roturas de doble cadena mediante el reconocimiento de marcas de histonas y la cooperación con sensores aguas arriba como ATM. 53BP1 promueve la unión de extremos no homólogos (NHEJ) y limita la resección de los extremos del ADN, influyendo así en la elección de la vía de reparación en oposición a la recombinación homóloga dependiente de BRCA1. A través de estas actividades, favorece la estabilidad del genoma, la progresión de la fase S y la señalización de puntos de control, y su desregulación se ha implicado en la carga mutacional y en los reordenamientos cromosómicos observados en múltiples contextos de cáncer. TP53BP1 también se utiliza ampliamente como lectura funcional para la formación de focos de daño en el ADN y la competencia de reparación en estudios de estrés replicativo y respuestas genotóxicas.
53BP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TP53BP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TP53BP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TP53BP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TP53BP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.