Plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1B (m): sc-420186

Présentation

Epb41l3 code la protéine 4.1B, un adaptateur cytosquelettique associé à la membrane qui relie des protéines transmembranaires au réseau cortical actine–spectrine et contribue à l’organisation de la forme cellulaire, de la polarité et de l’adhésion. Dans les tissus de souris, 4.1B participe à la stabilité membranaire et à l’architecture des jonctions, influençant des processus tels que la croissance des neurites, la migration cellulaire et la signalisation dépendante du contact. Grâce à ses fonctions d’échafaudage, 4.1B peut moduler la distribution des récepteurs et des molécules d’adhésion, avec un impact sur les voies de remodelage du cytosquelette et la mécanotransduction. Une régulation altérée d’EPB41L3/4.1B a été associée, dans des modèles expérimentaux, à une désorganisation tissulaire et à des phénotypes pertinents pour la suppression tumorale, l’invasion et l’homéostasie neurologique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Epb41l3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Epb41l3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Epb41l3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 4.1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Epb41l3 pour l'étude de la signalisation de 4.1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Epb41l3 essentiels à la fonction de 4.1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Epb41l3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le 4.1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le 4.1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Epb41l3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le 4.1B plasmide HDR (m) et le 4.1B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Epb41l3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Epb41l3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.