Plasmide Double Nickase (h) 3β-HSD: sc-400825-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 3β-HSD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 3β-HSD Double Nickase (h) et le plasmide 3β-HSD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSD3B1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 3β-HSD | sc-400825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 3β-HSD | sc-400825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSD3B1 code la 3β‑hydroxystéroïde déshydrogénase/Δ5‑Δ4 isomérase de type 1 (3β‑HSD), une enzyme microsomale qui catalyse des étapes clés de la stéroïdogenèse en convertissant les 3β‑hydroxystéroïdes Δ5 en leurs produits Δ4‑cétostéroïdes, notamment la conversion de la prégnénolone en progestérone et de la déhydroépiandrostérone en androstènedione. Par ces réactions, elle régule le flux au sein des voies de biosynthèse des androgènes, des œstrogènes, des glucocorticoïdes et des minéralocorticoïdes, et influence la disponibilité cellulaire des hormones stéroïdiennes. Une activité ou une expression modifiée de HSD3B1 peut déplacer le métabolisme intracrine des stéroïdes et fait l’objet d’études dans des contextes où la signalisation et la différenciation dépendantes des hormones sont perturbées, notamment en biologie endocrinienne et de la reproduction, ainsi que dans des modèles de maladies hormonodépendantes.
3β-HSD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSD3B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSD3B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSD3B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSD3B1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.