Plasmide CRISPR/Cas9 KO 20S Proteasome β2 (h): sc-403536

Présentation

PSMB2 code la sous-unité catalytique β2 du cœur 20S du protéasome humain, composant central du système ubiquitine–protéasome qui régule le renouvellement des protéines dépendant de l’ATP et le traitement des antigènes. Au sein du protéasome 26S, la sous-unité β2 du 20S contribue au clivage protéolytique des substrats polyubiquitinylés, façonnant la protéostasie, la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et des voies de signalisation telles que NF-κB, via la dégradation contrôlée de régulateurs clés. L’activité du protéasome influence la surveillance immunitaire en générant des peptides destinés à la présentation par le CMH de classe I et affecte la stabilité de protéines impliquées dans les voies de réponse aux dommages de l’ADN et d’apoptose. Une fonction du protéasome dérégulée et une expression altérée des sous-unités du protéasome ont été impliquées dans la biologie des cancers, la signalisation inflammatoire et des phénotypes neurodégénératifs d’agrégation protéique, faisant de PSMB2 une cible utile pour des études mécanistiques de la protéostasie et de l’adaptation cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 20S Proteasome β2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PSMB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PSMB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PSMB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 20S Proteasome β2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PSMB2 pour l'étude de la signalisation de 20S Proteasome β2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PSMB2 essentiels à la fonction de 20S Proteasome β2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PSMB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le 20S Proteasome β2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le 20S Proteasome β2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PSMB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le 20S Proteasome β2 plasmide HDR (h) et le 20S Proteasome β2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PSMB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PSMB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.