20S Proteasome β1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401676-ACT

PSMB1 kodiert die katalytische β1‑Untereinheit des menschlichen 20S‑Proteasom-Kerns, der als Teil des 26S‑Proteasom-Komplexes die regulierte Proteolyse ausführt. Diese Aktivität ist zentral für den ubiquitinabhängigen Proteinabbau, die Antigenprozessierung für die MHC‑Klasse‑I‑Präsentation sowie für die Aufrechterhaltung der Proteostase unter zellulärem Stress. Die Proteasomfunktion ist mit der Zellzykluskontrolle, DNA‑Schadensantworten und entzündlichen Signalwegen verknüpft, indem sie die Menge wichtiger regulatorischer Proteine mitbestimmt. Dysregulierte Proteasomaktivität und eine veränderte PSMB1‑Expression werden häufig im Zusammenhang mit Überlebensprogrammen von Krebszellen, neurodegenerativem proteotoxischem Stress und immunbezogenen Phänotypen untersucht.

20S Proteasome β1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PSMB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

20S Proteasome β1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PSMB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PSMB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen 20S Proteasome β1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PSMB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von 20S Proteasome β1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des 20S Proteasome β1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PSMB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.