15-LO Double Nickase Plasmid (h): sc-401591-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 15-LO Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 15-LO Double-Nickase-Plasmid (h) und 15-LO Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ALOX15 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 15-LO: sc-133085
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
15-LO Double Nickase Plasmid (h) | sc-401591-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
15-LO Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401591-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ALOX15** kodiert die **15-Lipoxygenase-1 (15-LO)**, eine nicht-hämhaltige Eisen-Dioxygenase, die die Oxygenierung mehrfach ungesättigter Fettsäuren wie Arachidon- und Linolsäure katalysiert und dabei **15-HETE** bzw. **13-HODE** erzeugt. Diese Lipidmediatoren formen Eicosanoid- und spezialisierte pro-resolvierende Lipidnetzwerke, die entzündliche Signalübertragung, das Redox-Gleichgewicht und das Remodeling von Membranlipiden beeinflussen. Die ALOX15-Aktivität ist an der Polarisierung von Makrophagen, der epithelialen Differenzierung und an Antworten auf oxidativen Stress beteiligt – über Crosstalk mit Signalwegen wie **NF-κB**, **PPAR**-Signalgebung und zytokinregulierter Lipidmetabolisierung. Eine dysregulierte 15-LO-Expression oder -Aktivität wurde mit entzündlichen Erkrankungen, atherosklerotischen Prozessen sowie kontextabhängigen Rollen in der Tumorbiologie in Verbindung gebracht, was 15-LO zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien lipidgetriebener Signalwege macht.
15-LO Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ALOX15-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ALOX15 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ALOX15-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ALOX15-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.