Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 σ: sc-401096-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 σ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 14-3-3 σ Double Nickase (h) et le plasmide 14-3-3 σ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SFN. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 14-3-3 σ Antibody (E-11): sc-166473
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 σ | sc-401096-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 14-3-3 σ | sc-401096-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SFN code la protéine adaptatrice humaine 14-3-3 sigma (stratifine), un membre de la famille 14-3-3 qui se lie à des motifs phosphosérine/phosphothréonine afin de moduler la localisation des protéines, leur stabilité et la sortie de signalisation. Elle est surtout connue pour coordonner le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress en influençant les régulateurs cycline‑CDK et d’autres effecteurs phosphorylés, reliant ainsi la signalisation des dommages à l’ADN à l’arrêt du cycle cellulaire et à des programmes de différenciation. Par ces interactions, 14-3-3 sigma contribue à l’homéostasie épithéliale et à l’organisation du cytosquelette, et elle interfère avec des voies fréquemment perturbées lors de la transformation oncogénique et du stress génotoxique. Des altérations de l’expression ou de la régulation de SFN ont été rapportées dans de nombreux contextes de cancer et la protéine est souvent étudiée comme marqueur d’une signalisation des points de contrôle dérégulée et de la biologie tumorale épithéliale.
14-3-3 σ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SFN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SFN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SFN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SFN.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.