γS-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419834

Übersicht

Crygs kodiert das murine γS‑Kristallin, ein in hoher Menge vorkommendes Strukturprotein im Zytoplasma der Augenlinse, das zur Transparenz und zu den Brechungseigenschaften der Linse beiträgt, indem es dicht gepackte Proteinanordnungen stabilisiert. Als Mitglied der β/γ‑Kristallin‑Superfamilie unterstützt γS‑Kristallin die langfristige Proteinhomöostase in einer kernlosen Umgebung, in der veränderte Faltung, Aggregation oder posttranslationale Modifikationen die Lichtdurchlässigkeit der Linse beeinträchtigen können. Eine Störung des Kristallin‑Gleichgewichts steht in Wechselwirkung mit Proteostase‑Signalwegen, einschließlich chaperon‑unterstützter Faltung und Stressantworten, die die Proteinsolubilität über die Lebensspanne beeinflussen. Genetische und biochemische Veränderungen von Kristallinen werden häufig genutzt, um Phänotypen der Linsentrübung zu modellieren und Mechanismen der kataraktassoziierten Proteinaggregation zu untersuchen.

Das γS-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Crygs-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Crygs-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Crygs nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die γS-crystallin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Crygs-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der γS-crystallin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Crygs-Exone abzielen, die für die γS-crystallin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Crygs-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom γS-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom γS-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Crygs-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das γS-crystallin HDR-Plasmid (m) und γS-crystallin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Crygs-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Crygs-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.