Plasmide Double Nickase (h) γ-FR: sc-403347-NIC

FOLR3 code le récepteur du folate gamma (γ‑FR), une protéine de liaison au folate ancrée à la glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui peut également être libérée sous forme soluble, influençant la disponibilité extracellulaire du folate et le métabolisme monocarbone dépendant du folate. En modulant la gestion du folate, γ‑FR est associé à la biosynthèse des nucléotides et à des processus liés à la méthylation qui structurent les programmes de prolifération et de différenciation cellulaires. L’expression de FOLR3 est marquée dans les contextes de la lignée myéloïde et est fréquemment étudiée comme marqueur de l’état des cellules immunitaires, des microenvironnements inflammatoires et du remodelage tissulaire. Une signalisation dérégulée des récepteurs du folate et la biologie du transport du folate sont pertinentes pour l’étude des hémopathies malignes, des cellules myéloïdes associées aux tumeurs et des situations où une utilisation altérée du folate affecte la stabilité du génome et la régulation épigénétique.

γ-FR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOLR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOLR3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOLR3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOLR3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.