Plasmide CRISPR d'Activation (h) γ-FR: sc-403347-ACT

Le gène humain **FOLR3** code le récepteur du folate γ (γ-FR), un membre de la famille des récepteurs du folate associé au glycosylphosphatidylinositol (GPI), impliqué dans la liaison au folate et l’homéostasie cellulaire du folate, soutenant le métabolisme à un carbone nécessaire à la biosynthèse des nucléotides et aux réactions de méthylation. Par son lien avec la disponibilité en folates, γ-FR est connecté à des voies influençant la réplication et la réparation de l’ADN, l’équilibre rédox et la régulation épigénétique, des processus fréquemment perturbés dans les cellules à prolifération rapide ou ayant subi une reprogrammation métabolique. Les variations d’expression des récepteurs du folate ont été étudiées dans des contextes de biologie des cellules hématopoïétiques et immunitaires, ainsi que dans des maladies où le métabolisme du folate et l’état de méthylation contribuent à des programmes transcriptionnels altérés. En tant que protéine de surface liant le folate, γ-FR constitue également un outil accessible pour étudier la prise en charge des nutriments médiée par les récepteurs et les phénotypes métaboliques en aval dans des modèles de cellules humaines.

γ-FR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOLR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

γ-FR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOLR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOLR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de γ-FR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOLR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de γ-FR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie γ-FR dans les cellules tumorales présentant une expression de FOLR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.