γF-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419833

Übersicht

Crygf kodiert γF‑Kristallin, ein in der Mausaugenlinse sehr häufig vorkommendes Struktur‑Kristallin, das den Brechungsindex, die Transparenz und die langfristige Stabilität der Faserzellen unterstützt. γ‑Kristalline sind durch dicht gepackte β‑Faltblatt‑Domänen gekennzeichnet, die zu einer hohen Proteindichte beitragen und gleichzeitig die Lichtstreuung minimieren; ihre Aufrechterhaltung hängt von Proteostase‑Netzwerken der Linse ab, einschließlich Chaperon‑Interaktionen, Redox‑Gleichgewicht und einem nur geringen Proteinumsatz. Störungen der Kristallin‑Zusammensetzung oder ‑Löslichkeit können die Linsenarchitektur beeinträchtigen, Proteinaggregation fördern und die Anfälligkeit für kataraktähnliche Trübungsphänotypen in experimentellen Modellen erhöhen. Crygf dient daher als nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung der Linsenentwicklung, der Differenzierung von Faserzellen und von Mechanismen der Proteinstabilität im Kontext eines weitgehend postmitotischen Gewebes.

Das γF-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Crygf-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Crygf-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Crygf nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die γF-crystallin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Crygf-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der γF-crystallin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Crygf-Exone abzielen, die für die γF-crystallin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Crygf-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom γF-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom γF-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Crygf-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das γF-crystallin HDR-Plasmid (m) und γF-crystallin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Crygf-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Crygf-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.