Plasmide CRISPR/Cas9 KO γF-crystallin (m): sc-419833

Présentation

Crygf code la γF-cristalline, une cristalline structurale très abondante dans le cristallin de l’œil chez la souris, qui contribue à l’indice de réfraction, à la transparence et à la stabilité à long terme des cellules fibreuses. Les γ-cristallines se caractérisent par des domaines en feuillets β fortement compactés, qui permettent une forte densité protéique tout en minimisant la diffusion de la lumière ; leur maintien dépend des réseaux de protéostasie du cristallin, notamment des interactions avec des chaperonnes, de l’équilibre rédox et d’un renouvellement protéique limité. Une perturbation de la composition ou de la solubilité des cristallines peut altérer l’architecture du cristallin, favoriser l’agrégation des protéines et accroître la susceptibilité à des phénotypes d’opacification de type cataracte dans des modèles expérimentaux. Crygf constitue donc un point d’entrée utile pour étudier le développement du cristallin, la différenciation des cellules fibreuses et les mécanismes de stabilité protéique dans le contexte d’un tissu largement post-mitotique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γF-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Crygf dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Crygf, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Crygf à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γF-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Crygf pour l'étude de la signalisation de γF-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Crygf essentiels à la fonction de γF-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Crygf pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γF-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γF-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Crygf. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γF-crystallin plasmide HDR (m) et le γF-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Crygf pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Crygf définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.