Plasmide CRISPR/Cas9 KO γ Enolase (m): sc-420179

Présentation

Eno2 code la γ-énolase (énolase spécifique des neurones), une enzyme glycolytique qui catalyse la conversion du 2‑phosphoglycérate en phosphoénolpyruvate et soutient le métabolisme énergétique neuronal. Chez la souris, la γ-énolase est enrichie dans les neurones et les tissus neuroendocriniens et relie le métabolisme central du carbone à des programmes cellulaires impliqués dans la différenciation, la survie et l’adaptation au stress. Une expression altérée d’ENO2/γ-énolase est largement utilisée comme marqueur de l’état des cellules neuronales et neuroendocriniennes et a été associée à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, les lésions hypoxiques/ischémiques et le métabolisme tumoral. Ces caractéristiques font d’Eno2 un point d’entrée utile pour étudier la reprogrammation métabolique et la régulation spécifique aux types cellulaires dans le système nerveux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γ Enolase (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eno2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eno2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eno2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γ Enolase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eno2 pour l'étude de la signalisation de γ Enolase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eno2 essentiels à la fonction de γ Enolase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eno2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γ Enolase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γ Enolase plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eno2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γ Enolase plasmide HDR (m) et le γ Enolase (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eno2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eno2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.