γENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422827
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- γENaC O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico γENaC, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
γENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422827 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Scnn1g codifica a subunidade γ do canal epitelial de sódio (γENaC), um determinante-chave da entrada de Na⁺ sensível à amilorida através das membranas apicais em tecidos epiteliais. Em conjunto com as subunidades α e β, o γENaC regula o transporte transepitelial de sódio, influenciando a homeostase do líquido na superfície das vias aéreas, a reabsorção renal de sódio e o equilíbrio do volume de fluidos. A atividade do canal é controlada pelo processamento proteolítico e pelo tráfego de membrana, integrando-se a programas responsivos à aldosterona e a redes downstream de transporte iônico, como o manuseio de sal acoplado à Na⁺/K⁺-ATPase. A desregulação das subunidades do ENaC tem sido associada a fenótipos de hidratação epitelial e balanço de sal alterados, reforçando sua relevância em estudos de fisiologia das vias aéreas e dos rins e de distúrbios relacionados ao transporte de íons.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO γENaC (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Scnn1g em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Scnn1g, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Scnn1g na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína γENaC.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Scnn1g para a investigação da sinalização de γENaC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Scnn1g críticos para a função γENaC
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Scnn1g para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo γENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo γENaC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Scnn1g. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo γENaC Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR γENaC (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Scnn1g para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Scnn1g definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.