γENaC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422827

Descripción general

Scnn1g codifica la subunidad γ del canal epitelial de sodio (γENaC), un determinante clave de la entrada de Na⁺ sensible a amilorida a través de las membranas apicales en tejidos epiteliales. Junto con las subunidades α y β, γENaC regula el transporte transepitelial de sodio, que influye en la homeostasis del líquido de la superficie de las vías respiratorias, la reabsorción renal de sodio y el equilibrio del volumen de líquidos. La actividad del canal se controla mediante procesamiento proteolítico y tráfico de membrana, integrándose con programas sensibles a la aldosterona y con redes de transporte iónico posteriores, como el manejo de sales acoplado a la Na⁺/K⁺-ATPasa. La desregulación de las subunidades de ENaC se ha relacionado con fenotipos de hidratación epitelial y balance de sales alterados, lo que respalda su relevancia en estudios de fisiología de vías respiratorias y riñón, y de trastornos asociados del transporte iónico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO γENaC (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Scnn1g en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Scnn1g junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Scnn1g tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína γENaC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Scnn1g para la investigación de la señalización de γENaC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Scnn1g críticos para la función de γENaC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Scnn1g para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido γENaC CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido γENaC CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Scnn1g. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR γENaC (m) y el plásmido HDR γENaC (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Scnn1g para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Scnn1g definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.