Plasmide Double Nickase (h) γC-crystallin: sc-402940-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) γC-crystallin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide γC-crystallin Double Nickase (h) et le plasmide γC-crystallin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRYGC. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) γC-crystallin | sc-402940-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) γC-crystallin | sc-402940-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CRYGC** code la **γC‑cristalline**, une protéine structurale très abondante du cristallin qui contribue à l’indice de réfraction, à la transparence et à la stabilité à long terme des cellules fibreuses. En tant que membre de la superfamille des **β/γ‑cristallines**, la γC‑cristalline favorise un empaquetage protéique très dense et une résistance à l’agrégation, des processus essentiels à la protéostasie dans l’environnement des fibres du cristallin, largement dépourvu d’organites. Les perturbations du repliement et de la solubilité des cristallines recoupent les réponses au stress oxydatif et l’entretien des protéines du cristallin dépendant de chaperonnes, reliant ainsi une homéostasie altérée à la formation d’agrégats diffusant la lumière. Les variations génétiques ou une stabilité dérégulée de la γC‑cristalline sont associées à des phénotypes héréditaires d’opacification du cristallin, offrant un point d’entrée moléculaire pour l’étude de mécanismes pertinents pour la cataracte.
γC-crystallin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRYGC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRYGC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRYGC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRYGC.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.