γB-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402939

Übersicht

CRYGB kodiert γB‑Kristallin, ein in hoher Menge vorkommendes, lösliches Strukturprotein der Augenlinse von Wirbeltieren, das zum Brechungsindex und zur langfristigen Transparenz der Linse beiträgt. γB‑Kristallin ist an der Assemblierung des Kristallin-Netzwerks sowie an Prozessen der Proteinhomöostase beteiligt, die die Integrität der Linsenfaserzellen erhalten, wobei eine dichte Packung und hohe Stabilität entscheidend sind, um Lichtstreuung zu minimieren. Eine Beeinträchtigung der Kristallin-Stabilität oder eine erhöhte Neigung zur Aggregation ist mit Linsentrübungen verbunden, wodurch CRYGB ein relevanter Genort für die Untersuchung von Mechanismen der Proteinfaltung, Fehlfaltung und Proteostase in differenzierten okulären Geweben ist. Da Linsenfaserzellen weitgehend postmitotisch sind, bietet CRYGB außerdem ein Modell, um zu untersuchen, wie langlebige Proteine im Verlauf der Zeit auf oxidativen und umweltbedingten Stress reagieren.

Das γB-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CRYGB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CRYGB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CRYGB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die γB-crystallin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CRYGB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der γB-crystallin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CRYGB-Exone abzielen, die für die γB-crystallin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CRYGB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom γB-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom γB-crystallin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CRYGB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das γB-crystallin HDR-Plasmid (h) und γB-crystallin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CRYGB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CRYGB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.