Plásmido CRISPR de Activación (h) ΔN p73: sc-437274-ACT

La ΔN p73 humana es una isoforma de TP73 truncada en el extremo N que modula programas transcripcionales que controlan la progresión del ciclo celular, la resistencia a la apoptosis, la diferenciación y las respuestas celulares al estrés. Al carecer del dominio canónico de transactivación, la ΔN p73 puede actuar de forma dominante negativa frente a miembros de la familia p53, remodelando las redes de señalización downstream que regulan las respuestas al daño del ADN y la apoptosis mitocondrial. La expresión alterada de ΔN p73 se ha vinculado con fenotipos de proliferación y supervivencia desregulados en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluida la biología tumoral y procesos del neurodesarrollo. Su actividad se cruza con el control de checkpoints, la regulación de la cromatina y la expresión génica específica de linaje, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la reconfiguración de las vías de la familia p53.

ΔN p73 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ΔN p73 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ΔN p73. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ΔN p73 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ΔN p73 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.